同位素標記定量

iTRAQ（isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）&TMT（Tandem Mass Tags）分別由AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標記定量技術(shù)，利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側(cè)鏈基團，不同分子量的試劑對不同來源的樣品進行標記從而實現(xiàn)不同樣品間蛋白質(zhì)組的比較。

iTRAQ/TMT試劑由三部分組成：報告基團、平衡基團和反應基團。反應基團形成2-10種等質(zhì)量同位素標簽。iTRAQ/TMT試劑標記酶解后的肽段，可與氨基酸N端及側(cè)鏈的伯胺基團發(fā)生反應。在一級譜圖中，來自于不同樣本的同一肽段，標記后表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。在二級譜圖中，報告基團、平衡基團和反應基團之間的鍵斷裂，帶不同同位素標簽的同一肽段產(chǎn)生質(zhì)量不同的報告離子，根據(jù)報告離子的豐度可獲得樣本間相同肽段的定量信息，再經(jīng)過軟件處理得到蛋白質(zhì)的定量信息。

iTRAQ實驗步驟

1. 樣品制備

2. 酶解消化

3. iTRAQ標記：

4. 樣本混合/肽段分級

5. 數(shù)據(jù)處理及生信分析

結(jié)果展示

火山圖

實驗周期及交付標準

1. 實驗周期：6周左右

2. 交付標準：蛋白定量結(jié)果、鑒定結(jié)果、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、生信分析結(jié)果（GO分析、KEGG分析等等）

需確認的信息

1. 樣本的種屬

2. 樣本的類型（組織or細胞or血液）

3. 樣本的數(shù)量及分組

4. 分析要求