NuSmart®核酸直接釋放技術(shù)細菌鑒定中的應用方向
細菌屬于原核生物的一種,雖然結(jié)構(gòu)相對簡單,但是在生物界屬于數(shù)量最多的一類生物。細菌在生物界扮演著多重角色,既有乳品生產(chǎn)、抗生素生產(chǎn)、廢水處理等積極的一面,也有作為病原菌感染人和牲畜從而導致疾病傳播的危害一面。所以了解和控制細菌的特征和特性,對日常生產(chǎn)生活至關(guān)重要。
實驗室條件下,細菌的鑒定主要有培養(yǎng)、生化鑒定、血清學鑒定等,但是這些方法均費時費力,尤其是細菌培養(yǎng)。而分子生物學方法是近年來更多被應用的方法,例如PCR技術(shù)。該技術(shù)對不易生長,培養(yǎng)條件復雜,未知細菌等表現(xiàn)良好??偨Y(jié)發(fā)現(xiàn)PCR在細菌中的應用包括以下方向:
1、基于16S rDNA基因的快速鑒定;
2、特異性基因的鑒定,例如毒力基因、耐藥基因等;
3、食品微生物檢測;
4、細菌數(shù)量動態(tài)檢測;
5、常見呼吸道病原菌篩查;
6、細菌DNA圖譜制作等。
對于實驗室工作人員來說,細菌難培養(yǎng),細菌增殖數(shù)量不夠,環(huán)境中細菌復雜程度高等難點。而能夠成功培養(yǎng)到目標細菌,且數(shù)量達標是PCR的關(guān)鍵前提。目前實驗室工作人員常用細菌DNA柱式提取試劑盒進行基因組DNA的提取純化。該方法作為經(jīng)典方法長期被使用,但是整個操作過程需要40-90分鐘不等,使用溶菌酶和蛋白酶K等生物活性酶類,多次反復離心,步驟繁多、使初學的操作者體驗樂趣嚴重降低。我司開發(fā)的NuSmart®微生物 PCR 試劑盒che底解決以上痛點問題。優(yōu)點如下:
—對樣本量要求低(1-2uL菌液,1個菌斑)
—操作快速(5分鐘釋放基因組DNA)
—操作簡單
—檢出率達99.99%
案例A 對數(shù)生長期細菌快速擴增16S rDNA
革蘭氏陰性菌:1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌
革蘭氏陽性菌:6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌
使用NuSmart®微生物 PCR 試劑盒(貨號Nu-Mi01)處理對數(shù)生長期菌液,2× MIC Smart Mix擴增16S rDNA基因。
案例B 單菌落快速擴增16S rDNA
革蘭氏陰性菌:1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌
革蘭氏陽性菌:6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌
使用NuSmart®微生物 PCR 試劑盒(貨號Nu-Mi01)處理菌斑(至于生理鹽水中),2× MIC Smart Mix擴增16S rDNA基因。
案例C 甘油菌快速擴增16S rDNA
革蘭氏陰性菌:1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌
革蘭氏陽性菌:6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌
使用NuSmart®微生物 PCR 試劑盒(貨號Nu-Mi01)處理甘油菌,2× MIC Smart Mix擴增16S rDNA基因。
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