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ReadyAMP®PCR直接擴增技術(shù)應(yīng)用在細菌16s rDNA鑒定中的流程
更新時間:2024-11-08   點擊次數(shù):760次

ReadyAMP®PCR直接擴增技術(shù)應(yīng)用細菌16s rDNA鑒定中的流程

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隨著分子學(xué)的發(fā)展,細菌16S rDNA序列的鑒定逐漸成為細菌特征的“金標(biāo)準(zhǔn)”。大部分實驗室中正逐步使用該方法替代傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)、生化鑒定等方法。16S rDNA因其序列在物種間的高度多樣性,成為細菌分類研究的“分子鐘”,素有“細菌化石”之稱。

16S rDNA鑒定意義重大,主要體現(xiàn)在以下幾個方面:

1、測序結(jié)果和已知細菌16S rDNA序列數(shù)據(jù)庫進行比較,可以確定未知細菌的分類和物種關(guān)系。對臨床微生物和環(huán)境微生物意義重大。

2、通過比較不同細菌的16S rDNA序列,可以推測相互之間的親緣關(guān)系和進化關(guān)系,進而了解細菌的進化和演化史。

3、通過環(huán)境樣本中細菌16S rDNA序列比較,可以分析和總結(jié)出不同細菌在不同環(huán)境下對自然界的功能和作用。

4、菌落中16S rDNA可變區(qū)進行鑒定,可提供菌落組成、表達豐度、以及系統(tǒng)進化分析。為菌落與環(huán)境、環(huán)境與人類的相互作用提供數(shù)據(jù)支持。

但是常規(guī)獲得16S rDNA序列的方法如圖1。實驗室工作人員zui常用的細菌DNA提取試劑盒,也就是通用的離心柱式提取基因組

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1 傳統(tǒng)離心柱提取和ReadyAMP®快速16S rDNA細菌鑒定試劑盒對比

 

DNA。作為傳統(tǒng)且經(jīng)典方法,該方法對長期從事提取工作的實驗室人員來說存在幾個難點:

1、提取時間長達40-90分鐘

2、需要使用溶菌酶、蛋白酶K等酶類

3、需要使用多種設(shè)備,包括恒溫浴、離心機等

4、革蘭氏陽性菌產(chǎn)量低

針對以上痛點和難點,我司開發(fā)了ReadyAMP®快速16S rDNA細菌鑒定試劑盒,操作流程見圖1。該方法最大的特點如下:

1、簡單便捷、一步完成;

2、檢測線低至104/mL細菌;

3、檢測樣本豐富,例如對數(shù)生長期菌液、菌斑、甘油菌等;

4、樣本需求量低,例如菌液/甘油菌1-3μL、菌斑1個;

5、革蘭氏陰性菌檢出;

6、革蘭氏陽性菌99.99%檢出;

7、難培養(yǎng)樣本有效;

8、珍貴樣本有效;

 

已驗證的細菌包括:

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案例A——對數(shù)生長期細菌快速擴增16S rDNA

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以對數(shù)生長期菌液為模板,使用ReadyAMP®快速16S rDNA細菌鑒定試劑盒(貨號Nu-16S01)擴增16S rDNA,以菌液對應(yīng)硅膠柱提取基因組為對照。

 

 

案例B——單菌落快速擴增16S rDNA

圖片5.png

 

以對單菌置生理鹽水中為模板,使用ReadyAMP®快速16S rDNA細菌鑒定試劑盒(貨號Nu-16S01)擴增16S rDNA,以菌液對應(yīng)硅膠柱提取基因組為對照。

 

 

 

 

 

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