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轉(zhuǎn)染試劑AD600050轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞質(zhì)粒2024新
更新時間:2024-12-31   點擊次數(shù):475次

轉(zhuǎn)染試劑AD600050轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞質(zhì)粒2024新

 

RAW264.7細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑進入細胞后可以被代謝的新型小分子多肽轉(zhuǎn)染試劑,對細胞無毒性,不易出現(xiàn)細胞死亡,不激活細胞免疫機制。

一、RAW264.7細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品詳情:

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,此技術(shù)成為新的蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細胞、懸浮細胞,如:T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等;可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細胞;用于將 DNA 和 siRNA 轉(zhuǎn)染到真核細胞系和各種原代細胞中;轉(zhuǎn)染細胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑。

二、產(chǎn)品說明:

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號:AD600025 、AD600050、AD600075、AD600150

規(guī)格:0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3、儲存條件

常溫運輸,4℃保存,可保存兩年,拒絕反復(fù)凍融。

三、RAW264.7細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小6000bp效果圖和轉(zhuǎn)染操作方法

圖片1.png

 

操作方法

提前 1 天接種細胞:細胞匯合度在 60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。

四、注意事項:

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水,但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右,甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,內(nèi)毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性,會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒)。

3、復(fù)合物的制備過程中是絕不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋,只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,如果進行了稀釋會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養(yǎng)板。

5、轉(zhuǎn)染 24 小時后進行正常換液,不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。

6、原代細胞、免疫細胞轉(zhuǎn)染時,細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。

 

 


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